Priama imunofluorescenčná detekcia

Dôkaz tkanivových štruktúr, protilátok a patogénov prostredníctvom imunitného značenia je populárny, moderný a presný. Imunofluorescencia sa týka imunitného značenia pripravenými fluorescenčnými protilátkami, ktoré sú vystavené žiareniu pod UV svetlom.

Na Priama imunofluorescenčná detekcia substrát sa skúma priamo pomocou luminóznych protilátok, bez primárnych protilátok alebo umelých antigénov.

Čo je priama imunofluorescenčná detekcia?

Priama imunofluorescenčná detekcia je diagnostická metóda založená na znalostiach imunológie, imunofarbenia a imunohistochémie. Zameriava sa tu na schopnosť protilátok viazať sa na špecifické miesta v tkanive alebo na antigény v sére. Tieto miesta sú epitopy.

V biochemickej diagnostike existujú umelé protilátky alebo mimetiká (singulárne: mimetické), ktoré umožňujú, aby tieto väzby protilátka-antigén boli označené fluorescenciou alebo rádioaktivitou. Umelé protilátkové konjugáty sa na jednej strane viažu na epitopy a na druhej strane majú fluorescenčný marker v prípade imunofluorescencie. Toto je alternatíva k použitiu rádioaktívnych markerov. Zvláštnosťou priamej detekcie imunofluorescencie v porovnaní s nepriamou detekciou je to, že protilátka, ktorá sa viaže na epitop antigénu v skúmanom materiáli, tiež predstavuje protilátkový konjugát s fluorescenčným markerom. Na priamu detekciu nie sú potrebné ďalšie protilátky.

Fluoresceín, ktorý svieti pod UV svetlom, a fluoresceín izotiokyanát (FITC) sa používajú ako farbivá na výrobu umelých protilátkových konjugátov v imunofluorescencii. Zatiaľ je to trochu komplikované, ale priama imunofluorescenčná detekcia je štandardnou diagnostickou metódou lekárskeho laboratória pre celý rad lekárskych otázok. Protilátky s fluorescenčným farbivom sú pripravené na predaj.

Funkcia, účinok a ciele

Na vyšetrenie tkanív na farbenie určitých štruktúr v tkanive je k dispozícii priama detekcia imunofluorescencie. Sú však k dispozícii aj pre jednotlivé bunky. Prietoková cytometria tu hrá hlavnú úlohu. Nakoniec sú tu uvedené imunotesty na tuhé a kvapalné fázy. Imunofluorescenčné vyšetrenia tkanív sú obzvlášť dôležité v onkológii, t.j. pri liečení rakovinových ochorení.

Antigény špecifické pre nádor v tkanive nádoru môžu byť detegované priamo pomocou imunofluorescencie. Tieto vyšetrenia na vzorkách tkanív z nádorov sú často dôležité, aby sa zistilo, odkiaľ existujúce metastázy pochádzajú z tela, alebo aby sa dalo posúdiť, či je nádor benígny alebo malígny. Vyšetrenie jednotlivých buniek pomocou priamej imunofluorescenčnej detekcie sa používa na nájdenie vírusových antigénov, bakteriálnych antigénov a ďalších epitopov.

Napríklad môžete zistiť, či sú bunky infikované vírusom a v akom štádiu cyklu infekcie sú bunky. Názov FACS (= Fluorescence-Activated Cell Sorting) je vysoko účinná metóda prietokovej cytometrie, pri ktorej sú bunky označené fluorescenciou distribuované do rôznych skúmaviek v závislosti od typu farby. Tento postup je dôležitý pri imunológii, hematológii a infekčných chorobách.

Imunofluorescenčné imunotesty umožňujú priamu detekciu environmentálnych toxínov, geneticky modifikovaných organizmov a určitých doplnkových látok v potravinách. V tomto experimentálnom usporiadaní je vždy tuhá a kvapalná fáza. Priamo bolo možné zistiť aj množstvo patogénov vrátane vírusu HIV, ktorý spôsobuje AIDS. Pri detekcii infekčných a autoimunitných chorôb je však skôr detekcia protilátok než antigénov. Jedná sa o obranné molekuly tvorené imunitným systémom tela. Podľa tu uvedenej definície nie sú také dôkazy priame dôkazy, pretože fluorescenčné protilátky sa nespájajú priamo s vlastnými antigénmi tela, ale s antigénmi testovacieho usporiadania.

Tieto antigény v experimentálnom usporiadaní sú zase spojené s vlastnými protilátkami tela. Imunofluorescenčná priama detekcia bežných infekcií, napríklad vírusov HIV a chlamydií, sa používa iba v špeciálnych detekčných a potvrdzovacích testoch. Existujú testy na mnoho ďalších chorôb. Vo väčšine situácií je nepriama detekcia protilátok vhodnejšia na infekčné choroby, pretože imunitný systém tela má dômyselnú schopnosť zapamätať si predchádzajúce infekcie. V iných situáciách sa priama detekcia antigénov a nepriama detekcia protilátok navzájom dopĺňajú. Posledné uvedené ukazujú, že infekcia sa vyskytla už skôr, zatiaľ čo prvá poskytuje presnejšiu informáciu o aktuálnom stave aktivity patogénu.

Svoje lieky nájdete tu

Riziká, vedľajšie účinky a nebezpečenstvá

Pri priamej detekcii imunofluorescencie, rovnako ako pri všetkých lekárskych dôkazoch, existujú dve riziká: riziko falošného pozitívneho výsledku a riziko falošného negatívneho výsledku. Falošné, pozitívne výsledky spôsobujú pacientovi psychologické nepohodlie a veľký stres.

Preto sa k pozitívnym výsledkom pridávajú ďalšie skúšobné postupy, najmä ak diagnóza vedie k drastickým zmenám v živote. Riziko falošného negatívneho výsledku je, že sa pacient v dostatočnom predstihu nedozvie o hrozbe pre svoje zdravie a možno ani pre verejné zdravie. Preto je dobré urobiť veľa výskumu a urobiť a ponúknuť veľké množstvo rôznych imunofluorescenčných priamych detekcií pripravených na predaj. Spolu s inými metódami priameho a nepriameho zisťovania chorôb a patológií to zvyšuje presnosť diagnostiky.

Priama detekcia je založená na protilátkovom konjugáte, ktorý sa na jednej strane viaže na epitopy antigénov a na druhej strane tiež spôsobuje fluorescenciu. Takýto výrobok sa preto používa iba v jednom type skúšobného postupu a nepoužíva sa v prípade iných druhov skúšobného postupu.Toto je dôležitý procedurálny rozdiel od nepriamych dôkazov, v ktorých fluorescenčným protilátkam predchádza primárna protilátka na väzbu epitopu. Protilátkový konjugát je preto vhodný pre rôzne testy. Tento procedurálny rozdiel sa líši od lekárskeho rozdielu medzi nepriamou detekciou protilátok a priamou detekciou antigénov.