imunoelektroforéza

imunoelektroforéza sa používa na laboratórnu diagnostickú detekciu monoklonálnych protilátok v krvi pacienta. Monoklonálne protilátky sú odvodené od rovnakej bunky a sú namierené proti rovnakým antigénom. Z tohto dôvodu sa majú hodnotiť ako patologické, a ak sa preukáže, hovoria o chorobách, ako je napríklad Waldenströmova choroba.

Čo je to imunoelektroforéza?

Ióny majú rôznu mobilitu. Táto rôzna mobilita tvorí základ postupu elektroforézy. Tieto metódy navzájom oddeľujú rôzne látky pomocou elektrického poľa a gravitácie. Známym spôsobom v tejto oblasti je imunoelektréza.

Je to kvalitatívna diagnostická metóda, ktorá sa používa na detekciu monoklonálnych protilátok. Protilátky sú imunologicky aktívne proteínové látky zo špecifickej bunkovej línie. Monoklonálne protilátky sú všetky založené na rovnakých B lymfocytoch, a preto sú namierené proti jedinému epitopu. Každá prirodzená imunitná reakcia na napadajúce antigény zodpovedá polyklonálnej odpovedi, a preto je namierená proti rôznym epitopom. Monoklonálna imunitná reakcia preto poskytuje indikácie patologických procesov tela.

Monoklonálne protilátky viažu rôzne molekuly s vysokou špecifickosťou. Táto väzba sa môže preukázať imunoelektroforézou. Tento postup je kvalitatívnym postupom v laboratórnej diagnostike a skladá sa z dvoch druhov postupov, elektroforézy v sére a imunodifúzie.

Funkcia, účinok a ciele

Imunoelektroforéza kombinuje metodiku elektroforézy séra s imunodifúziou. Sérum pacienta sa umiestni na agarózový gél alebo film z acetátu celulózy. Aplikuje sa aj kontrolné sérum. Po aplikácii nasleduje elektroforetická separácia vzoriek. Medzi deliace čiary sa použijú antiséra, IgG, IgA, IgM, kyselina octová pre normálnu elektroforézu a kappa a lambda.

To vytvára reakciu s protilátkami v sére pacienta, čo vytvára línie zrážok. V závislosti od použitého antiséra a polohy a tvaru jednotlivých línií je možné vyvodiť závery o imunoglobulínoch obsiahnutých v ľahkých reťazcoch kappa alebo lambda. V prípade lambda pruhu existujú voľné ľahké reťazce tvorené protilátkami. Laboratórium poskytuje ďalšie dôkazy prostredníctvom zriedkavých IgE a IgD, čo umožňuje presné stanovenie imunoglobulínov. Metóda imunodifúznej elektroforézy sa uskutočňuje podľa Pierra Grabara a Curtisa Williamsa a zodpovedá kombinácii elektroforézy proteínov na agarózovom géli a difúzie protilátok.

Najskôr sa uskutoční elektroforéza na agarózovom géli. Následne obsiahnuté protilátky difundujú proti pásom antigénov a tým vytvárajú zrazené oblúky. Toto je potrebné odlíšiť od imunoelektroforézy rakiet podľa Laurella, ktorá zodpovedá elektroforéze proteínov v agarózovom géli, z ktorých každá má protilátky v určitej koncentrácii. V géli je mierne bázický pufor, ktorý umožňuje len migráciu antigénov a ktorý núti väčšinu protilátok k izoelektrickému bodu prostredníctvom vystavenia mierne zásaditej hodnote pH, až kým sa neprestanú elektroforeticky pohybovať.

Na začiatku imunitnej elektroforézy rakety je nadbytok antigénu, takže sa tvoria rozpustné komplexy antigén-protilátka. Počas elektroforézy dochádza aj k väzbe medzi antigénmi a inými protilátkami. Týmto spôsobom sa tvoria imunoprecipitáty v bode ekvivalencie, ktoré sa podobajú raketovým hodnotám s výškou úmernou koncentrácii antigénu. Na vyhodnotenie testu sa meria výška zrazeniny.

Svoje lieky nájdete tu

Riziká, vedľajšie účinky a nebezpečenstvá

Detekcia monoklonálnych protilátok má osobitný význam pre diagnostiku mnohopočetného myelómu a Waldenströmovej choroby. Poskytnuté dôkazy hovoria o malígnej degenerácii imunitných buniek. Mnohopočetný myelóm zodpovedá rakovine v kostnej dreni, ktorá sa vyznačuje malígnym množením buniek produkujúcich protilátky v plazme.

Tieto plazmatické bunky produkujú protilátky a ich fragmenty. Zhubné plazmatické bunky vždy pochádzajú z bežných prekurzorových buniek, a preto sú geneticky totožné. Produkujú iba monoklonálne protilátky. Malignita tohto ochorenia môže zodpovedať prekanceróznemu štádiu, ale môže tiež dosiahnuť vysoko malígne štádium, ktoré bez liečby je rýchlo fatálne. Príznaky choroby sú výsledkom malígneho rastu buniek alebo protilátok a fragmentov protilátok. Medzi najbežnejšie príznaky patrí bolesť kostí, rozpúšťanie kostí a spontánne zlomeniny.

Hladina vápnika v krvi sa často zvyšuje. Okrem toho sa abnormálne protilátky často ukladajú v tkanive a spôsobujú funkčné poruchy v orgánoch, čo môže viesť k symptómom, ako je zlyhanie obličiek alebo zhoršený prietok krvi. Waldströmova choroba je tiež malígnym nádorovým ochorením. Presnejšie povedané, je to malígne lymfómové ochorenie, ktoré sa zaraďuje medzi pomaly postupujúce a takmer asymptomatické B-bunkové non-Hodgkinove lymfómy. Vo väčšine prípadov sa pri ochorení dá zistiť abnormálna produkcia monoklonálnych IgM v dôsledku aktivity malígnych lymfómových buniek.

Waldenströmova choroba je svojimi vlastnosťami veľmi podobná mnohopočetnému myelómu, ale zvyčajne vykazuje priaznivejší priebeh. Väčšina pacientov s Waldenströmovou chorobou je v čase, keď sú diagnostikovaná, do veľkej miery asymptomatická. Iní pacienti vykazujú včasné príznaky, ako je nešpecifická únava alebo periférne neuropatie, ktoré sú spôsobené ukladaním monoklonálnej IgM v myelínovom obale. Polyneuropatia môže vyvolať aj malé množstvo IgM. U iných pacientov sa nevyskytuje polyneuropatia, a to ani pri vysokých hladinách. Okrem toho sa môžu vyskytnúť nešpecifické príznaky, ako je horúčka, nežiaduce chudnutie alebo nočné potenie. Charakteristická je aj bolesť kostí.

V dôsledku nadprodukcie IgM sa z krvi stáva hypervisus, takže uvedené príznaky môžu súvisieť so symptómami syndrómu hyperviskózy. Vo väčšine prípadov sa táto tendencia ku krvácaniu prejavuje častými bolesťami hlavy, bolesťami hlavy, nevoľnosťou alebo neostrým zrakom a akustickými ťažkosťami. Na detekciu malígnych ochorení tohto typu sa imunoelektroferéza stala štandardným diagnostickým postupom.